网站旧版  |  加入收藏
金沙贵宾会官方0029客服电话金沙贵宾会2999comQQ金沙贵宾会2999comQQ金沙贵宾会2999comQQ
金沙贵宾会官方0029微信服务号

产品目录

pET-N-GST-Thrombin-C-His质粒图片
产品货号:
YT972
中文名称:
pET-N-GST-Thrombin-C-His质粒
英文名称:
pET-N-GST-Thrombin-C-His Plasmid
产品规格:
1μg|100μg
发货周期:
1~3天
产品价格:
询价
pET-N-GST-Thrombin-C-His是一种用于表达N端含GST标签(Glutathione S-transferase tag,GST tag)或C端含His标签(His tag)的重组蛋白的原核表达质粒,也可用于表达N端含GST标签并且同时C端含His标签的重组蛋白。GST和His双标签有利于通过GST柱和镍柱两种方法来纯化目的蛋白,使目的蛋白的纯度更高。本质粒N端GST标签后有Thrombin酶切位点,可通过Thrombin蛋白酶切除N端的GST标签。本质粒为卡那霉素抗性。

本质粒含有T7启动子/lac操纵子,可以在异丙基硫代半乳糖苷(IPTG)的诱导下高效启动目的蛋白表达。在多克隆位点的前面有一个GST标签的编码序列,后面有一个His标签的编码序列,后者含有6个组氨酸(6X His)。因此在多克隆位点根据读码框插入不含终止密码子的目的基因就可以表达N端含有GST标签并且C端含有His标签的目的蛋白。也可以在目的基因后面添加终止密码子,这样就可以表达仅在N端含有GST标签的目的蛋白。如果在NdeI和多克隆酶切位点之间按照读码框插入不带有终止密码子的目的基因,这样就可以表达仅C端带有His标签的目的蛋白。

本载体在N端GST标签与多克隆位点之间含有Thrombin蛋白酶识别的6肽序列LVPRGS,对应的核酸序列为CTGGTTCCGCGTGGATCC,因此在目的蛋白纯化后可以利用Thrombin酶切除N端的GST标签。Thrombin蛋白酶酶切发生在六肽序列的R和G之间,因此在酶切去除GST标签的时候会在目的蛋白的N端留下两个额外的氨基酸残基GS。

通常可以采用如GoldBalb GST-tag Purification Resin(YT958)、GST标签蛋白纯化试剂盒(YT959)、GoldBalb His-tag Purification Resin(YT616)或His标签蛋白纯化试剂盒(YT046)等纯化本质粒表达的目的蛋白,也可以使用GST抗体(YT784/YT722)和His-tag抗体(YT789)检测和少量地分离纯化目的蛋白。

pET-N-GST-Thrombin-C-His质粒的主要信息如下:
Feature NucleotidePosition
f1 origin12-467
Kanamycin resistance ORF563-1645
PBR 322 origin2084
LacI coding sequence3518-4597
T7 promoter4988-5004
GST tag coding sequence5076-5732
Thrombin recognition site sequence5739-5756
Multiple cloning site(BamHI-XhoI)5751-5798
His tag coding sequence5799-5816
T7 Terminator5884-5930


pET-N-GST-Thrombin-C-His质粒(5955bp)的图谱如下:
pET-N-GST-Thrombin-C-His质粒(5955bp)的图谱

pET-N-GST-Thrombin-C-His质粒中推荐使用的测序引物序列如下:
pET-F primer(5619-5638):5′- AAACGTATTGAAGCTATCCC-3′
pET-R primer(5869-5888):5′-TGCTAGTTATTGCTCAGCGG-3′

使用说明:
1.首次使用1μg包装的本产品时,请先取少量本质粒转化大肠杆菌,进行质粒小量、中量或大量抽提后再用于后续用途。抽提获得的质粒可以通过酶切电泳进行鉴定,或通过测序进行鉴定。
2.100μg包装的本产品质粒浓度为0.1μg/μl,共1ml。可以直接用于酶切或者转染细胞。
3.pET-N-GST-Thrombin-C-His质粒在其多克隆位点适当酶切后可以插入待表达的目的基因,构建的质粒可以用常规方法转入表达菌株。
金沙贵宾会官方0029 |  关于咱们 |  联系咱们 |  在线咨询 |  网站地图
2013-2018 金沙贵宾会002999 京ICP备14007103号
XML 地图 | Sitemap 地图
Baidu
sogou