网站旧版  |  加入收藏
金沙贵宾会官方0029客服电话金沙贵宾会2999comQQ金沙贵宾会2999comQQ金沙贵宾会2999comQQ
金沙贵宾会官方0029微信服务号

产品目录

高纯质粒中提试剂盒图片
产品货号:
WE0163
中文名称:
高纯质粒中提试剂盒
英文名称:
PlaPure Midi Extraction Kit
产品规格:
50次
发货周期:
1~3天
产品价格:
询价
??本试剂盒提供一种简单、快捷、高效的提取质粒的方法,在碱裂解法裂解细胞的基础上,采用独特的硅基质膜吸附技术和试剂配方,通过离心吸附柱在高盐状态下高效专一的结合溶液中的质粒DNA,经过两步洗涤,一步洗脱,最大限度的去除蛋白质、基因组、RNA和其他杂质。得到的质粒DNA可直接用于细胞转染、PCR、酶切、测序、连接等生物学实验。

试剂盒组成
组份50次
Buffer P130ml
Buffer P230ml
Buffer N340ml
Buffer PB10ml
Buffer PW(浓缩液)10ml
Buffer EB10ml
RNase A(10 mg/ml)600μl
吸附柱DL及收集管50套


自备试剂:无水乙醇。

实验前准备及重要注意事项
1、所有组分可在干燥、室温(15~30℃)环境稳定保存1年,更长时间保存可置于2~8℃,加入RNase A的Buffer P1 置于2~8℃可稳定保存6个月。
2、第一次使用前,将RNase A溶液全部加入到Buffer P1中,混匀,置于2–8℃保存,使用前需在室温中放置一段时间,恢复至室温后使用。
3、第一次使用前应按照试剂瓶标签的说明在Buffer PW中加入无水乙醇。
4、使用前若发现Buffer P2、Buffer N3、Buffer PB有沉淀,可在37℃水浴几分钟,即可恢复澄清(请勿剧烈晃动Buffer P2)。
5、注意不要直接接触Buffer P2 和Buffer N3,使用后应马上盖紧盖子。
6、提取质粒的量和纯度与细菌培养浓度、菌株种类、质粒大小、质粒拷贝数等因素有关。
7、所有离心步骤均可在室温下进行。

操作步骤
1、取5-15ml过夜培养的菌液加入离心管(自备)中,13000rpm(~~~16200×g)离心1分钟收集菌体沉淀,尽量吸弃上清。
注意:质粒拷贝数较低或>10 kb时,可以使用更多菌液通过二次离心将菌体沉淀收集到同一个离心管中,同时后续所加试剂Buffer P1、P2及N3的量需加倍。所加试剂的量必须能够充分裂解菌体,菌体过多、裂解不充分都会降低质粒的提取效率。
2、向留有菌体沉淀的离心管中加入500μl Buffer P1(请先检查是否已加入RNase A),使用移液器或涡旋振荡器充分混匀,悬浮菌体沉淀。
注意:如果菌块未彻底混匀,将会影响裂解效果,导致提取量和纯度偏低。
3、向离心管中加入500μl Buffer P2,温和地上下颠倒混匀6-8次,使菌体充分裂解,室温放置3-5分钟。此时溶液应变得清亮粘稠。。
注意:温和混匀,不要剧烈震荡,以免打断基因组DNA,造成提取的质粒中混有基因组DNA片段。并且此步骤所用时间应不超过5分钟,避免质粒受到破坏。
4、向离心管中加入700μl Buffer N3,马上上下颠倒混匀6-8次,此时出现白色絮状沉淀,室温放置5分钟。13000rpm离心10分钟。
注意:Buffer N3 加入后应马上混匀,避免产生局部沉淀。
5、将步骤4中所得的上清液转移到已装入收集管的吸附柱DL中,13000rpm离心1分钟,倒掉收集管中的废液,将吸附柱重新放回收集管中。
注意:吸附柱的最大容积为750μl,如果样品体积大于750μl可分批加入。
6、向吸附柱中加入150μl Buffer PB,13000rpm离心1分钟,倒掉收集管中的废液,将吸附柱重新放回收集管中。
7、向吸附柱中加入750μl Buffer PW(请先检查是否已加入无水乙醇),13000rpm离心1分钟,倒掉收集管中的废液。
8、将吸附柱重新放回收集管中,13000rpm离心1分钟。
注意:这一步的目的是将吸附柱中残余的乙醇去除,乙醇的残留会影响后续的酶促反应(酶切、PCR等)。
9、将吸附柱置于一个新的离心管(自备)中,向吸附膜中间部位加入100-200μl Buffer EB,室温放置2-5分钟,13000rpm离心2分钟,将质粒溶液收集到离心管中。-20℃保存质粒。
注意:
1)为了增加质粒的回收效率,可将得到的溶液重新加入到吸附柱中,室温放置2-5分钟,13000rpm离心2分钟。将质粒溶液收集到离心管中。
2)洗脱液的pH值对于洗脱效率有很大影响。若用水做洗脱液,应保证其pH值在7.0-8.5范围内(可以用NaOH将水的pH值调到此范围),pH值低于7.0会降低洗脱效率。
3)质粒拷贝数较低或>10 kb时,Buffer EB在65-70℃水浴预热,适当延长吸附和洗脱的时间,可以增加提取效率。

储存条件:室温(15~30℃)
金沙贵宾会官方0029 |  关于咱们 |  联系咱们 |  在线咨询 |  网站地图
2013-2018 金沙贵宾会002999 京ICP备14007103号
XML 地图 | Sitemap 地图
Baidu
sogou