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血凝块基因组DNA提取试剂盒(离心吸附柱法)图片
产品货号:
WH0006
中文名称:
血凝块基因组DNA提取试剂盒(离心吸附柱法)
英文名称:
Extraction kit for genomic DNA from blood clots
产品规格:
50次
发货周期:
1~3天
产品价格:
询价
本试剂盒采用可以特异性结合DNA的离心吸附柱和独特的缓冲液系统,提取血液中的基因组DNA。离心吸附柱中采用的硅基质材料为本企业特有新型材料,高效、专一吸附DNA,可最大限度去除杂质蛋白及细胞中其他有机化合物。提取的基因组DNA片段大,纯度高,质量稳定可靠。使用本试剂盒回收的DNA可适用于各种常规操作,包括酶切、PCR、文库构建、Southern杂交等实验。简单快速,一小时内即可获得超纯的基因组DNA。常见得率(抗凝血样本)20-60μg/ml。

提取实例:
血凝块基因组DNA提取试剂盒(离心吸附柱法)实例
应用本试剂盒提取不同量的血凝块(液化后的使用量),洗脱体积为100μl,提取后进行琼脂糖电泳,上样量为3μl,分子量标准D15000(WH0142)

试剂盒组成:
组分50T
缓冲液GE40ml
缓冲液GD13 ml
漂洗液PW15 ml
洗脱缓冲液TB15 ml
Proteinase K2×1 ml
吸附柱CB10个
收集管(15 ml)20个

保存条件:室温(15-25℃)干燥条件下,可保存12个月,更长时间的保存可置于2-8℃。2-8℃保存条件下,若溶液产生沉淀,使用前应将试剂盒内的溶液在室温放置一段时间,必要时可在37℃水浴中预热10min,以溶解沉淀。

选配组分:RNase A(100mg/ml)(目录号:WH0217);液化柱CX2(目录号:WH9002)

注意事项:(请务必在使用本试剂盒之前阅读此注意事项)
1.样品应避免反复冻融,否则会导致提取的DNA片段较小且提取量也下降。
2.若缓冲液GE中有沉淀,可在37℃水浴中重新溶解,摇匀后使用。
3.所有离心步骤均为使用台式离心机,室温下离心。
4.若提取血凝块样本,请自备血凝块液化柱CX2,目录号:WH9002。

使用方法:
第一次使用前请先在缓冲液GD和漂洗液PW中加入无水乙醇,加入体积请参照瓶上的标签。

1.向15 ml离心管加入200μl Proteinase K (20 mg/ml)溶液。
2.处理材料:
a.如果提取血液样本,直接加入0.5-3 ml血液样本,混匀。
b.如果提取血凝块样本,将一个血凝块液化柱CX2(选配组分,目录号:WH9002)放入上述装有Proteinase K溶液的15 ml离心管中,再向过滤柱加入0.5-3 ml血凝块样本,6000rpm(~8228×g)离心1 min。
??注意:也可以先将血液样本加到离心管中,或者先将处理后的血凝块样本离心收集到离心管中,再加入Proteinase K,但要保证彻底混匀。
3.向装有血液样本的离心管中加入2.4 ml缓冲液GE,振荡30 sec混匀。
??注意:若提取2-3 ml样本,可以增加缓冲液GE用量至3.6 ml。
??注意:如果需要去除RNA,可加入40 μl RNase A(100mg/ml)溶液(选配组分,目录号:WH0217),振荡15 sec,室温放置5 min。
4.65℃放置10min,每隔3 min振荡一次,以助裂解。简短离心以收集管盖内壁的水珠(如遇特殊样本,未能很好裂解,请适当延长孵育时间)。
5.向样本中加入2 ml无水乙醇,混匀,此时可能出现絮状沉淀。
??注意:若从水浴锅取出的样本温度过高,请在室温冷却后再加入无水乙醇。若提取2-3 ml血液样本,可以增加无水乙醇量至3 ml。
6.将上一步所得溶液和絮状沉淀的一半转移至一个吸附柱CB5中(吸附柱放入15 ml收集管中),3000rpm (~1850×g)离心3 min,倒掉废液,将吸附柱CB5放回收集管中。
7.将步骤6剩余的溶液再转入同一个吸附柱中,重复步骤6操作。
8.向吸附柱CB5中加入2 ml缓冲液GD(使用前请先检查是否已加入无水乙醇),5000rpm(~4500×g)离心1 min,倒掉废液,将吸附柱CB5放回收集管中。
9.向吸附柱CB5中加入2 ml缓冲液PW(使用前请先检查是否已加入无水乙醇),5000rpm(~4500×g)离心1 min,倒掉废液,将吸附柱CB5放回收集管中。
10.向吸附柱CB5中加入2 ml缓冲液PW,5000rpm (~4500×g)离心15 min,丢弃收集管,将吸附柱CB5放到一个新的15 ml离心管中。
??注意:漂洗液中乙醇的残留会影响后续的酶反应(酶切、PCR等)实验,此步骤目的是将剩余的乙醇清除。
11.向吸附膜的中间部位悬空滴加300 μl洗脱缓冲液TB,室温放置5 min,5000rpm(~4500×g)离心2 min,将溶液收集到离心管中。
??注意:洗脱缓冲液体积不应少于200μl,体积过小影响回收效率。为增加基因组DNA的得率,可将离心得到的溶液再加入吸附柱CB5中,室温放置2 min,5000rpm(~4500×g)离心2 min。洗脱液的pH值对于洗脱效率有很大影响。若用ddH2O做洗脱液应保证其pH值在7.0-8.5范围内,pH值低于7.0会降低洗脱效率;且DNA产物应保存在-20℃,以防DNA降解。

DNA浓度及纯度检测:
1.得到的基因组DNA片段的大小与样品保存时间、操作过程中的剪切力等因素有关。回收得到的DNA片段可用琼脂糖凝胶电泳和紫外分光光度计检测浓度与纯度。
2.DNA应在OD260处有显著吸取峰,OD260值为1相当于大约50 μg/ml双链DNA、40 μg/ml单链DNA。
3.OD260/OD280比值应为1.7-1.9,如果洗脱时不使用洗脱缓冲液,而使用ddH2O,比值会偏低,因为pH值和离子存在会影响光吸取值,但并不表示纯度低。
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