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产品目录

病毒DNA/RNA提取试剂盒(离心吸附柱法)图片
产品货号:
WH0014
中文名称:
病毒DNA/RNA提取试剂盒(离心吸附柱法)
英文名称:
Extraction kit for nucleic acid from virus
产品规格:
50次
发货周期:
1~3天
产品价格:
询价
本试剂盒采用高效、专一结合核酸的离心吸附柱和独特的缓冲系统,适合从血浆、血清和其它无细胞体液等样品中分离纯化病毒的DNA或者RNA,本试剂盒特别加入了Carrier RNA,可以从体系中轻松捕获微量核酸,具有方便快捷、产量高、重复性好的特点。所得病毒基因组DNA或RNA无蛋白、核酸酶或其它杂质的污染,可直接用于PCR、酶切、杂交、反转录等分子生物学实验。本试剂盒操作简单、快速,1h内即可获得高纯度DNA或RNA。用于各种病毒DNA/RNA核酸提取,如HCV、HIV、HPV、动物致病性病毒等。

产品特点:
·快速纯化得到高质量病毒DNA和RNA。
·重复性强,产量高。
·无有机抽提或乙醇沉淀。
·完全去除污染物和抑制剂,方便下游应用。

试剂盒组成:
组分50T
缓冲液GB15ml
缓冲液GD13 ml
漂洗液PW15ml
RNase-Free ddH2O(瓶装)15ml
Proteinase K1 ml
Carrier RNA310μg
RNase-Free ddH2O(管装)1 ml
RNase-Free吸附柱CR2(含2 ml收集管)50套
RNase-Free离心管(1.5 ml)50个

保存条件:室温(15-25℃)干燥条件下,可保存12个月,更长时间的保存可置于2-8℃。2-8℃保存条件下,若溶液产生沉淀,使用前应将试剂盒内的溶液在室温放置一段时间,必要时可在37℃水浴中预热10min,以溶解沉淀。Carrier RNA配置成储液后置于-20℃。

注意事项:(请务必在使用本试剂盒之前阅读此注意事项)
1.所有的离心步骤均在室温下进行(15-25℃)。
2.将样品平衡至室温。
3.试剂盒中提供的RNase-Free离心管(1.5 ml)供第13步洗脱步骤使用,其余离心管需自备。

Carrier RNA溶液的配制如下:
·向装有310μg Carrier RNA冻干粉的管子中加入310μl RNase-Free ddH2O,将Carrier RNA彻底溶解,得到终浓度为1 μg/μl的溶液,并按实验情况分装到RNase-Free的离心管中,置于-20 ℃储存。使用时按照提取的次数取出相应的溶液,该溶液应避免反复冻融,冻融次数不能超过3次。
·注意Carrier RNA冻干粉不能直接溶解于缓冲液GB中,必须先溶解在RNase-Free ddH2O中,再溶解至缓冲液GB中。
· Carrier RNA工作液:根据样品的数量计算所需缓冲液GB和Carrier RNA溶液的体积(见表1或使用以下公式计算),将缓冲液GB与Carrier RNA溶液颠倒混匀,即得到Carrier RNA工作液;为避免溶液出现起泡现象,请勿使用涡旋振荡。
??如果需要提取大量的样品,可根据以下公式计算:
??n×0.22 ml =y ml
??y ml×28 μl/ml=z μl
n=同时提取的样品个数,y=需要加入缓冲液GB的体积,z=需要加入Carrier RNA溶液的体积。

表1:步骤3中Carrier RNA工作液的配制:
样品个数GB(ml)Carrier RNA水溶液(μl)
10.226.2
20.4412.3
30.6618.5
40.8824.6
51.130.8
61.3237
71.5443.1
81.7649.3
91.9855.4
102.261.6
112.4267.8
122.6473.9
132.8680.1
143.0886.3
153.392.4
163.5298.6
173.74104.7
183.96110.9
194.18117
204.4123.2
214.62129.4
224.84135.5
235.06141.7
245.28147.8

注意:请将缓冲液GB与Carrier RNA溶液颠倒混匀,即得到Carrier RNA工作液;为避免溶液出现起泡现象,请勿使用涡旋振荡。

使用方法:
使用前请先在缓冲液GD和漂洗液PW中加入无水乙醇,加入体积请参照瓶上的标签。

1.用移液器将20 μl Proteinase K加入一个干净的1.5 ml离心管中。
2.向离心管中加入200 μl血浆/血清/淋巴液(样品需平衡至室温)。
??注意:如果样本体积小于200 μl,可加入0.9% NaCl溶液补充。
3.加入200 μl Carrier RNA工作液(为缓冲液GB与Carrier RNA溶液的混合液,配制方法如表1或按照公式计算)。盖上管盖,涡旋振荡15 sec混匀。
??注意:为了保证裂解充分,样品和Carrier RNA工作液需要彻底混匀。
4.在56℃孵育15 min。简短离心以收集附着在管壁及管盖的液体。
5.加入250 μl无水乙醇,此时可能会出现絮状沉淀。盖上管盖并涡旋振荡15 sec,彻底混匀。在室温(15-25℃)放置5 min。
??注意:如果周围环境高于25℃,乙醇需要再在冰上预冷后再加入。
6.简短离心以收集附着在管壁及管盖的液体。
7.仔细将离心管中的溶液和絮状沉淀全部转移至RNase-Free吸附柱CR2(吸附柱放在收集管中),盖上管盖,8000rpm (~6,000×g)离心1 min,弃废液,将吸附柱放回收集管中。
??注意:如果吸附柱上的液体未能全部离心至收集管中,请加大转速,延长离心时间至液体完全转移到收集管中。
8.小心打开吸附柱盖子,加入500 μl溶液GD(使用前请先检查是否已加入无水乙醇),盖上管盖,8000rpm (~6,000×g)离心1 min,弃废液,将吸附柱放回收集管。
9.小心打开吸附柱盖子,加入600 μl溶液PW(使用前请先检查是否已加入无水乙醇),盖上管盖,静置2 min,8000rpm (~6,000×g)离心1 min,弃废液,将吸附柱放回收集管。
10.重复步骤9。
11.小心打开吸附柱盖子,加入500 μl无水乙醇,盖上管盖,8000rpm (~6,000×g)离心1 min,弃废液。
??注意:乙醇的残留可能会对后续实验造成影响。
12.将吸附柱放回收集管中,12000rpm (~13400×g)离心3 min,使吸附膜完全变干,弃废液。
13.将吸附柱放入一个RNase-Free离心管(1.5 ml)中,小心打开吸附柱的盖子,室温放置3 min,使吸附膜完全变干。向吸附膜的中间部位悬空滴加20-150 μl RNase-FreeddH2O,盖上盖子,室温放置5 min。12000rpm (~13400×g)离心1 min。
??注意:确保洗脱液(RNase-Free ddH2O)在室温平衡后再使用。如果加入洗脱液的体积很小(小于50 μl),为了将膜上的DNA/RNA充分洗脱下来,应注意将洗脱液加到膜的中央位置。洗脱体积可以根据后续的实验要求灵活处理。
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