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产品目录

海洋动物组织基因组DNA提取试剂盒(离心吸附柱法)图片
产品货号:
WH0021
中文名称:
海洋动物组织基因组DNA提取试剂盒(离心吸附柱法)
英文名称:
Extraction kit for genomic DNA from marine animals tissue
产品规格:
50次|200次
发货周期:
1~3天
产品价格:
询价
本试剂盒是特别针对海洋动物的基因组提取试剂盒,已成功提取到鱼类、虾类、贝类、蟹类等海洋动物组织基因组DNA。无需酚/氯仿抽提,使用安全快捷方便,可最大限度去除海洋动物组织中的蛋白、脂肪及其他有机化合物等杂质。使用本试剂盒提取的基因组DNA可适用于各种常规操作,包括酶切、PCR、文库构建、Southern杂交等实验。

产品特点:
·专用性强:专为针对海洋动物开发出来的专项产品。
·操作时间短:1-2h左右即可获得高质量的海洋动物基因组DNA。
·无毒害:无需使用酚氯仿等有害试剂,操作安全。
·纯度高:可直接用于PCR、酶切、杂交等分子生物学实验。

提取得率:
材料建议孵育时间DNA得量
贝类组织0.5 h12-20μg
虾组织1 h8-14 μg
鱼类组织1 h15-40 μg


提取实例:
虾夷扇贝基因组DNA提取实例
虾夷扇贝基因组提取,起始量:腮20mg,其余30mg,100μl洗脱,3μl上样,琼脂糖凝胶浓度为1%,6V/cm,电泳20min。Marker:λDNA/Hind III

鲫鱼基因组DNA提取实例
鲫鱼基因组DNA提取,起始量:腮20mg,肌肉30mg,100μl洗脱,3μl上样,琼脂糖凝胶浓度为1%,6V/cm,电泳20min;Marker:λDNA/Hind III

虾肌肉组织基因组DNA提取实例

试剂盒组成:
组分50T200T
缓冲液GA15ml50ml
缓冲液GB15ml50ml
缓冲液GD13ml52ml
漂洗液PW15ml50ml
洗脱缓冲液TE15ml60ml
Proteinase K1ml4×1ml
吸附柱CB350个200个
收集管(2ml)50个200个

保存条件:室温(15-25℃)干燥条件下,可保存12个月,更长时间的保存可置于2-8℃。2-8℃保存条件下,若溶液产生沉淀,使用前应将试剂盒内的溶液在室温放置一段时间,必要时可在37℃水浴中预热10min,以溶解沉淀。

选配组分:RNase A(100mg/ml)(目录号:WH0217)

注意事项:(请务必在使用本试剂盒之前阅读此注意事项)
1.样品应避免反复冻融,否则会导致提取的DNA片段较小且提取量也下降。
2.若缓冲液GA或GB中有沉淀,可在37℃水浴中重新溶解,摇匀后使用。
3.所有离心步骤均为使用台式离心机,室温下离心。

使用方法:
使用前请先在缓冲液GD和漂洗液PW中加入无水乙醇,加入体积请参照瓶上的标签。

1.切取不多于30mg的组织材料,放入装有200μl GA缓冲液的离心管中,涡旋振荡15sec。
??注意:根据提取的组织不同,起始量也稍有不同,腮的细胞量较大,一般建议提取量不超过20 mg。
??如果需要去除RNA,可加入4 μl RNase A(100 mg/ml)溶液(客户自备,目录号:WH0217),振荡15 sec,室温放置5 min。
2.加入20 μl Proteinase K (20 mg/ml)溶液,涡旋混匀,简短离心以去除管盖内壁的水珠。在56℃放置,直至组织完全溶解,简短离心以去除管盖内壁的水珠,再进行下一步骤。
??注意:不同组织裂解时间不同,通常需0.5-2h即可完成。扇贝组织0.5 h基本可裂解完全,虾和鱼类组织1 h。每小时振荡混合样品2-3次,每次振荡混匀15 sec。
3.加入200μl缓冲液GB,充分颠倒混匀,70℃放置10min,溶液应变清亮,简短离心以去除管盖内壁的水珠。
??注意:加入缓冲液GB时可能会产生白色沉淀,一般70℃放置时会消失,不会影响后续实验。如溶液未变清亮,说明细胞裂解不彻底,可能导致提取DNA量少和提取出的DNA不纯。
4.加人200μl无水乙醇,充分颠倒混匀,此时可能会出现絮状沉淀,简短离心以去除管盖内壁的水珠。
5.将上一步所得溶液和絮状沉淀都加入一个吸附柱CB3中(吸附柱放入收集管中),12000rpm (~13400×g)离心30 sec,倒掉废液,将吸附柱CB3放回收集管中。
6.向吸附柱CB3中加入500 μl缓冲液GD(使用前请先检查是否已加入无水乙醇),12,000rpm (~13400×g)离心30 sec,倒掉废液,将吸附柱CB3放入收集管中。
7.向吸附柱CB3中加入600 μl漂洗液PW (使用前请先检查是否已加入无水乙醇),12000rpm(~13400×g)离心30 sec,倒掉废液,将吸附柱CB3放入收集管中。
8.重复操作步骤7。
9.将吸附柱CB3放回收集管中,12000rpm(~13400×g)离心2 min,倒掉废液。将吸附柱CB3置于室温放置数分钟,以彻底晾干吸附材料中残余的漂洗液。
??注意:这一步的目的是将吸附柱中残余的漂洗液去除,漂洗液中乙醇的残留会影响后续的酶反应(酶切、PCR等)实验。
10.将吸附柱CB3转入一个干净的离心管中,向吸附膜的中间部位悬空滴加50-200μl洗脱缓冲液TE,室温放置2-5 min,12000rpm (~13400×g)离心2 min,将溶液收集到离心管中。
??注意:洗脱缓冲液体积不应少于50 μl,体积过小影响回收效率。为增加基因组DNA的得率,可将离心得到的溶液再加入吸附柱CB3中,室温放置2 min,12000rpm(~13400×g )离心2 min。洗脱液的pH值对于洗脱效率有很大影响。若用ddH2O做洗脱液应保证其pH值在7.0-8.5范围内,pH值低于7.0会降低洗脱效率;且DNA产物应保存在-20℃,以防DNA降解。
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