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产品目录

微量质粒快速提取试剂盒图片
产品货号:
WH0034
中文名称:
微量质粒快速提取试剂盒
英文名称:
MicroPlasmid Rapid Extraction Kit
产品规格:
50次|200次
发货周期:
1~3天
产品价格:
询价
本试剂盒采用先进的硅胶膜吸附技术,高效专一地结合质粒DNA,操作简单、快速。每次处理1-4ml过夜培养的细菌培养液,仅需8min即可提取多至24μg的质粒DNA。使用本试剂盒提取的质粒DNA可适用于各种常规操作,包括酶切、PCR、测序、连接、转化、文库筛选、体外翻译、转染一些常规的传代细胞等。

产品特点:
·快速:步骤少,操作简单,仅需8min。
·高效:可提取菌体85%以上质粒DNA。
·配备了独特的颜色指示剂,可以清晰辨明抽提过程中样本的裂解程度,确保得到高效率、高纯度的质粒DNA。

质粒得率:
质粒类型处理量得率质粒
高拷贝质粒1-4ml6-24μgpTZ,pUC,pBS,pTG-T
低拷贝质粒1-4ml3-10 μgpBR322,pACYC及其衍生载体pSC101
及其衍生载体,SuperCos,pWE15


试剂盒组成:
组分50T200T
溶液P115ml60ml
溶液P215ml60ml
溶液P520ml80ml
漂洗液PWT15ml50ml
洗脱缓冲液TB15ml30ml
RNase A(10mg/ml)150μl600μl
颜色试剂75μl300μl
吸附柱CP350个200个
收集管(2ml)50个200个

保存条件:室温(15-25℃)干燥条件下,可保存12个月;更长时间的保存可置于2-8℃。2-8℃保存条件下,若溶液产生沉淀,使用前应先将试剂盒内的溶液在室温中放置一段时间,必要时可在37℃水浴中预热10 min以溶解沉淀。单独包装的RNase A在室温可稳定保存12个月。加入RNase A和颜色指示剂后的溶液P1应置于2-8℃保存,可稳定保存6个月。

注意事项:(请务必在使用本试剂盒之前阅读此注意事项)
1.溶液P1在使用前先加入RNase A和颜色指示剂(将试剂盒中提供的RNase A和颜色指示剂全部加入),混匀,置于2-8℃保存。
2.使用前请先检查溶液P2和P5是否出现浑浊,如有混浊现象,可在37℃水浴中加热几分钟,即可恢复澄清。
3.注意不要直接接触溶液P2和P5,使用后应马上盖紧盖子。
4.所有离心步骤均为使用常规台式离心机室温下进行离心,速度为12000rpm (~13400×g )。
5.提取的质粒量与细菌培养浓度、质粒拷贝数等因素有关。
6.颜色指示剂的使用:颜色指示剂是一种指示剂,用以指示整个操作的正确性,对人体无害。使用时按照颜色指示剂:溶液P1=1:200进行混合,彻底颠倒混匀,混匀后的溶液为澄清的红色。将混匀后的溶液加入到收集好的菌体中彻底混匀,由于菌体的存在,混匀后的溶液为浑浊的红色;添加溶液P2之后彻底混匀后,溶液的颜色为澄清的紫色,则说明充分裂解;再添加溶液P5至彻底混匀后,溶液为澄清的黄色,说明中和复性充分。
微量质粒快速提取试剂盒颜色指示剂的颜色变化

使用方法:
使用前请先在漂洗液PWT中加入无水乙醇,加入体积请参照瓶上的标签。

1.取1-4ml过夜培养的菌液,加入离心管中,使用常规台式离心机,12000rpm(~13400×g )离心1 min,尽量吸除上清(菌液较多时可以通过多次离心将菌体沉淀收集到一个离心管中)。
2.向留有菌体沉淀的离心管中加入150μl溶液P1(请先检查是否已加入RNase A和颜色指示剂),使用移液器或涡旋振荡器彻底悬浮细菌沉淀。
??注意:如果有未彻底混匀的菌块,会影响裂解,导致提取量和纯度偏低。
??颜色指示剂的加入对于后续PCR、酶切和测序都没有影响。使用时按照颜色指示剂:溶液P1=1:200进行混合,彻底颠倒混匀,混匀后的溶液为澄清的红色。将混匀后的溶液加入到收集好的菌体中彻底混匀,由于菌体的存在,混匀后的溶液为浑浊的红色。
3.向离心管中加入150μl溶液P2,温和地上下翻转6-8次使菌体充分裂解。
??注意:温和地混合,不要剧烈震荡,以免污染基因组DNA。此时菌液应变得清亮粘稠,如果未变得清亮,可能由于菌体过多,裂解不彻底,应减少菌体量。
由于使用了颜色指示剂,添加溶液P2彻底混匀后,溶液的颜色为澄清的紫色。如果在紫色中混杂有浑浊的红色,则说明裂解不充分,继续混匀直至溶液颜色完全变为澄清的紫色。
4.向离心管中加入350 μl溶液P5,马上快速地上下颠倒混匀12-20次,充分混匀,此时将出现絮状沉淀。12000rpm (~13400×g)离心2 min。
??注意:加入溶液P5后应马上混合,应快速上下颠倒混匀,避免产生局部沉淀。上清中含有少量微小白色沉淀对后续实验没有任何影响。如果上清中存在大量微小白色沉淀,可再次离心后取上清。由于使用了颜色指示剂,添加溶液P5彻底混匀后,溶液为澄清的黄色,如果在黄色中混有紫色,则说明复性不充分,继续混匀至溶液颜色完全变为澄清的黄色。
5.将上一步收集的上清液用移液器转移到吸附柱CP3中(吸附柱放入收集管中),注意尽量不要吸出沉淀。12000rpm (~13400×g)离心30 sec,倒掉收集管中的废液,将吸附柱CP3放入收集管中。
6.向吸附柱CP3中加入300 μl漂洗液PWT(请先检查是否已加入无水乙醇),12000rpm(~13400×g)离心30 sec,倒掉收集管中的废液,将吸附柱CP3放入收集管中。
7.将吸附柱CP3放入收集管中,12000rpm (~13400×g)离心1 min,目的是将吸附柱中残余的漂洗液去除。
8.将吸附柱CP3置于一个干净的离心管中,向吸附膜的中间部位滴加50-100 μl洗脱缓冲液TB,12,000rpm (~13400×g)离心30 sec将质粒溶液收集到离心管中。
??注意:洗脱缓冲液体积不应少于50 μl,体积过小影响回收效率。洗脱液的pH值对于洗脱效率有很大影响。
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