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产品目录

高效拭子基因组DNA提取试剂盒(离心吸附柱法)图片
产品货号:
WH0215
中文名称:
高效拭子基因组DNA提取试剂盒(离心吸附柱法)
英文名称:
Efficient Extraction kit for genomic DNA from swab
产品规格:
50次|200次
发货周期:
1~3天
产品价格:
询价
本试剂盒采用可以特异性结合DNA的离心吸附膜和独特的缓冲液系统,离心吸附板中采用的硅基质材料为新型材料,能够从口腔拭子、咽拭子以及漱口水等多种口腔样本中高效、专一吸附DNA,可最大限度去除杂质蛋白及细胞中其他有机化合物。提取的基因组DNA片段大,纯度高,质量稳定可靠。使用本试剂盒回收的DNA可适用于各种常规操作,包括酶切、PCR、文库构建、Southern杂交等实验。

试剂盒组成:
组分50次200次
组织消化液GHA30ml120ml
缓冲液GBS15ml60ml
去蛋白液RD24ml90ml
漂洗液PWE25ml50ml
洗脱缓冲液TB15ml30ml
Proteinase K500μl2×1ml
吸附柱CB250个200个
收集管(2ml)50个200个
离心管(1.5ml)50个200个

保存条件:室温(15-25℃)干燥条件下,可保存12个月,更长时间的保存可置于2-8℃。2-8℃保存条件下,若溶液产生沉淀,使用前应将试剂盒内的溶液在室温放置一段时间,必要时可在37℃水浴中预热10min,以溶解沉淀。

选配试剂:口拭子样本保存液(目录号:WH0214)

注意事项:请务必在使用本试剂盒之前阅读此注意事项。
1.样品应避免反复冻融,否则会导致提取的核酸片段较小且提取量降低。
2.若缓冲液GBS中有沉淀,可在室温中重新溶解,摇匀后使用。
3.如果样本不能及时提取,可保存在口拭子保存液中(目录号:WH0214),长期保存不会影响提取效果。

操作步骤
使用前请先在缓冲液GBS中加入异丙醇;在去蛋白液RD和漂洗液PWE中加入无水乙醇,加入体积请参照瓶上的标签。

1.处理材料:
1)口腔拭子样本提取
??将在面颊内擦拭过的拭子转移到2ml离心管中,加入500μl缓冲液GHA。加入10 μl Proteinase K溶液,涡旋10 sec混匀,65℃放置15-30 min,每隔10min涡旋混匀数次,取出300-350 μl进行后续实验。
2)咽拭子样本提取
??将在咽部擦拭过的拭子转移到5 ml离心管中,加入1 ml-2ml的组织消化液GHA,颠倒混匀。在提取前取出300-350 μl的样品,加入10 μl Proteinase K溶液,涡旋10 sec混匀,65℃放置30 min,每隔10min涡旋混匀数次。
3)唾液样本提取
??按照要求取出唾液样本,加入等体积的缓冲液GHA,颠倒混匀。在提取前取出300-350 μl的样品,加入10 μl Proteinase K溶液,涡旋10 sec混匀,65℃放置30 min,每隔10min涡旋混匀数次。
??注意:如果样本已经保存在其他厂家的样品保存液里,加入样品1/2体积的组织消化液GHA和10 μl Proteinase K溶液,涡旋10 sec混匀,65℃放置15-30 min,取出300-350 μl进行后续实验。提取咽拭子样本和唾液样本时,若组织消化液GHA不足,需另行购买。
2.加入500μl缓冲液GBS(使用前请先检查是否已加入异丙醇),充分颠倒混匀,室温放置5 min。
3.将上一步所得溶液都加入一个吸附柱CB2中(吸附柱CB2放入收集管中),12000rpm(~13400×g)离心30 sec,倒掉收集管中的废液,将吸附柱CB2放回收集管中。
4.向吸附柱CB2中加入500μl去蛋白液RD(使用前请先检查是否已加入无水乙醇),12000rpm (~13400×g)离心30 sec,倒掉收集管中的废液,将吸附柱CB2放回收集管中。
5.重复操作步骤4一次。
6.向吸附柱CB2中加入600 μl漂洗液PWE(使用前请先检查是否已加入无水乙醇),12000rpm (~13400×g)离心30 sec,倒掉收集管中的废液,将吸附柱CB2放回收集管。
7.重复操作步骤6一次。
8.12000rpm (~13400×g)离心2 min,倒掉废液。将吸附柱CB2室温放置数分钟,以彻底晾干吸附材料中残余的漂洗液。
9.将吸附柱CB2转入一个干净的离心管中,向吸附膜中间位置悬空滴加50 μl洗脱缓冲液TB,室温放置2-5 min,12000rpm (~13400×g)离心2 min。
10.将溶液收集到离心管中,并于适当条件保存。

DNA浓度及纯度检测:
·得到的基因组DNA片段的大小与样品保存时间、操作过程中的剪切力等因素有关。回收得到的DNA片段可用琼脂糖凝胶电泳和紫外分光光度计检测浓度与纯度。
· DNA应在OD260处有显著吸取峰,OD260值为1相当于大约50μg/ml双链DNA、40 μg/ml单链DNA。
· OD260/OD280比值应为1.7-1.9,如果洗脱时不使用洗脱缓冲液,而使用ddH2O,比值会偏低,因为pH值和离子存在会影响光吸取值,但并不表示纯度低。
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