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产品目录

2×pfu PCR MasterMix图片
产品货号:
RFT093
中文名称:
2×pfu PCR MasterMix
英文名称:
产品规格:
500μl|5×500μl
发货周期:
1~3天
产品价格:
询价
本品包含pfu DNA聚合酶、dNTPs、Mg2+、反应缓冲液、PCR反应的增强剂和优化剂以及稳定剂,浓度为2×。使用时,只需补加实验所需的引物和模板后即可进行PCR反应,可最大限度的减少人为误差,具有快速简便、稳定性好等优点。用于高保真的DNA片段的扩增。使用该产品得到的PCR扩增产物为平滑末端,不可以直接用于TA克隆,要通过平滑末端克隆法进行克隆。以50μl PCR反应体系为例,每次使用25μl 2×MasterMix,500μl可做20次 50μl PCR反应。

质量控制:以λDNA为模板,可以很好扩增5kb的DNA片段;以水稻基因组为模板,可以很好扩增3.2kb的DNA片段。

使用方法;
1、冰浴中彻底融化2×MasterMix,混匀后Minispin将溶液收集到管底。
2、按照下表在0.2ml PCR管中制备反应体系:
50μl反应体系终浓度
2×MasterMix25μl
上游引物 10μM1-5μl0.2-0.8μM
下游引物 10μM1-5μl0.2-0.8μM
模板×μl10pg-1μg
补至50μl

3. 快甩离心将反应液收集到管底。
4、PCR仪如果没有热盖加热的话,补加25μl矿物油。
5、PCR仪上实行以下程序:
步骤温度时间循环数
初始变性94℃5 min1
变性94℃30 sec25-40*
退火Tm-5℃*30 sec
延伸72℃0.5kb/min
最后延伸72℃5 min1

注: PCR 反应条件视模板、引物等的结构条件不同而各异。在实际操作中需根据模板、目的片段的大小、碱基序列和引物的长短等具体情况,设定最佳的反应条件(温度、时间等)。
6、电泳检测。
注:使用含染料的2×MasterMix可以直接上样;不含染料的2×MasterMix要与6×loading buffer混合后上样。

储存条件:-20℃,避免反复冻融。
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