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产品目录

细胞膜蛋白提取试剂盒图片
产品货号:
HR0029
中文名称:
细胞膜蛋白提取试剂盒
英文名称:
Cell membrane protein extraction kit
产品规格:
50T|100T
发货周期:
1~3天
产品价格:
询价
细胞膜蛋白提取试剂盒提供全套试剂,适用于从各种原代或传代细胞样本中提取膜蛋白,提取的膜蛋白纯度高,不含核蛋白和胞浆蛋白。提取过程简单方便。
制备的膜蛋白保持天然活性,而且绝少交叉污染。
本试剂盒提取的蛋白可用于Western Blotting、蛋白质电泳、免疫沉淀、ELISA、转录活性分析、Gel shift凝胶阻滞实验、酶活性测定等下游蛋白研究实验。
本试剂盒提取的蛋白为具有天然蛋白构象的活性蛋白。
本试剂盒中不含有EDTA,与金属螯和层析等下游应用兼容。
本试剂盒提取的蛋白样本含有高浓度的盐成分,不可直接用于2D电泳,需要除盐后再用于2D电泳。如下游实验需要直接用于等电聚焦、双向电泳,请使用我司其他货号的试剂盒。
本试剂盒提取的膜蛋白为细胞的总膜蛋白,需要单独的细胞器膜蛋白提取,请选用我司其他货号的试剂盒。
我企业可以提供针对动物细胞、组织、植物、真菌、酵母、微生物、液体、土壤等不同样本的蛋白提取试剂盒,包含用于非双向电泳和双向电泳等不同下游应用的试剂盒以及含去垢剂成分和不含去垢剂成分的蛋白提取试剂盒,总计300 多种蛋白提取试剂盒可供选择。我企业还可以提供针对动物、植物等不同样本的细胞核、线粒体、溶酶体、叶绿体等不同细胞器的提取试剂盒。

储存条件:2-8℃保存。
开盖后各组份按要求条件保存。
各组份储存条件:蛋白提取液2-8℃保存;膜蛋白溶解液2-8℃保存;蛋白酶抑制剂-20℃保存。
有效期:一年。
使用前请仔细阅读产品说明书
使用限制:本试剂盒仅供科学研究使用,不可用于诊断或治疗。
产品更新:我司会更新或升级产品,以优化和增强其使用性能,产品说明书会进行相应的版本更新。使用产品时,请参照随产品附带的说明书,不要参照网上下载的说明书,可能是不同的版本。
使用安全: 使用时需要合适的实验室外套,一次性手套。避免皮肤或粘膜与试剂接触。如果试剂不小心接触皮肤或眼睛,应马上用水冲洗。
质量控制: 金沙贵宾会2999com对每批产品进行严格测试以确保产品质量一致。

注意事项:
1.正式实验前请选取几个样本做预实验,以优化实验条件,取得最佳实验结果。
2.螺旋盖微量试剂管装的试剂在开盖前请短暂离心,将盖和管内壁上的液体离心至管底,避免开盖时试剂损失。
3.禁止与其他品牌的试剂混用,否则会影响使用效果。
4.样品或试剂被细菌或真菌污染或试剂交叉污染可能会导致错误的结果。
5.最好使用一次性吸头、管、瓶或玻璃器皿,可重复使用的玻璃器皿必须在使用前清洗并彻底清除残留清洁剂。
6.实验后完成后所有样品及接触过的器皿应按照规定程序处理。

产品特点:
1.使用方便,从细胞,组织中提取蛋白不需经过研磨、反复冻融、超声破碎等前处理。
2.提取过程简单方便。
3.含蛋白稳定剂,提取的蛋白稳定。
4.紫外检测蛋白浓度时,背景干扰低。
5.蛋白提取液含多种有效成分,可以充分释放胞浆蛋白和膜蛋白,又可结合释出的蛋白防止沉淀。
6.蛋白酶抑制剂抑制了蛋白的降解,蛋白酶抑制剂配方优化。蛋白酶抑制剂混合物包含6种独立的蛋白酶抑制剂AEBSF、Aprotinin、Leupeptin、Pepstatin A、Bestatin、E-64,每一种抑制剂可特异性抑制某一种或几种蛋白酶活性。该混合物优化的组成使其可以抑制几乎所有重要的蛋白酶活性,包括丝氨酸蛋白酶、半胱氨酸蛋白酶、天冬氨酸蛋白酶、丙氨酰-氨基肽酶等。
试剂盒以外自备仪器和试剂耗材:
仪器
●离心机● 振荡器● 涡旋混匀器● 移液器●冰箱●冰盒
耗材
●离心管● 吸头
试剂
● PBS(pH7.4,实验室常用的10mM磷酸缓冲盐溶液phosphate buffer saline/Dμlbecco’s PBS:约含8mM Na2HPO4、2mM KH2PO4、137mM NaCl和3mM KCl),也可用HBSS

使用方法:

使用注意事项:
● 旋帽离心管装的试剂在开盖前请短暂离心,将盖内壁上的液体甩至管底,避免开盖时液体洒落。
● 实验过程中的所有试剂须预冷;所有器具须放-20℃冰箱预冷。整个过程须保持样品处于低温。
●蛋白酶抑制剂储存期间溶液如果出现沉淀,不影响使用,溶解后正常使用。
●可以根据自己实验需要加入其它蛋白酶抑制剂单品。

1.提取液制备:
每200μl蛋白提取液A中分别加入2μl蛋白提取液B和2μl蛋白酶抑制剂混合物,混匀后置冰上备用。
【注】:
● 根据需要处理的样品数量准备蛋白提取液,蛋白酶抑制剂混合物不可以一次全部加入提取液。
● 加过蛋白酶抑制剂的提取液一周内未使用完,再次使用前需要再次加入蛋白酶抑制剂。
●以下步骤使用的蛋白提取液为此步配制好的含蛋白酶抑制剂的提取液。
2.取5-10×106个细胞,在4℃,500g条件下离心2-3分钟,小心汲取培养基,尽可能吸干,收集细胞。
【注】:
●细胞数量根据实验情况调整。由于膜蛋白含量较少,需要较多的细胞才能保证得率。
●在条件允许的情况下,尽可能加大细胞上样量。
3.用冷PBS洗涤细胞两次,每次洗涤后尽可能吸干上清。
4.在细胞沉淀中加入200-400μl冷的提取液A,高速涡旋振荡5秒,置2-8℃条件振荡30分钟-1小时。
【注】:
● 必须2-8℃低温振荡。
●用振荡器/摇床的较低转速,保持液体能晃动即可。
● 没有低温振荡条件可以不振荡,置2-8℃静置,延长时间,中间每隔几分钟用移液器吹打混匀。
● 提取液A 处理后细胞沉淀应明显减少,否则延长处理时间。
5.然后在4℃,12000g条件下离心3分钟,收集上清,弃沉淀。
6.将上清吸入另一干净离心管,置37℃水浴10分钟。然后在37℃,500g力离心2分钟。
【注】:
● 必须37℃水浴和离心。
● 没有37℃离心条件可以不离心,延长水浴时间至液体澄清分层明显即可。
7.此时溶液分为两层,小心移除上层,留下管底部下层大约20-50μl 液体。
【注】:
● 下层为粘稠状液体。
8.用30-100μl膜蛋白溶解液C溶解该液体,即得膜蛋白样品。
9.将上述蛋白提取物定量后分装于-80℃冰箱保存备用或直接用于下游实验。
【注】:
● 建议用BCA 法进行蛋白定量。
●蛋白样品-80℃存放一年没有问题。注意不要被蛋白酶水解掉,不要被细菌污染。
常见问题分析:
●蛋白浓度低?
膜蛋白丰度较低,需要尽可能加大细胞上样量。处理部分组织样本时可能没有裂解完全,导致蛋白浓度低。只要适当延长试剂A的处理时间即可。最好在持续振荡的条件下处理,没有振荡器也可间隔几分钟用吸头吹打混匀。
●用什么方法定量蛋白?
建议用BCA 法。不适合用Bradford 法,因为试剂A中含有干扰Bradford 法的组份,导致定量不准。如果已经进行过透析处理或者用脱盐柱改换过缓冲体系,则可以用Bradford 法定量。
● 提取的蛋白具有活性吗?
本试剂盒不含有离子型去垢剂组份,不破坏蛋白的结构,没有对蛋白质之间原有的相互作用的破坏,蛋白均保持其天然构象和活性。
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