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全能核酸降解酶(DNA/RNA)图片
产品货号:
MT0068
中文名称:
全能核酸降解酶(DNA/RNA)
英文名称:
Benzonase Nuclease
产品规格:
25KU|100KU|10000KU
发货周期:
1~3天
产品价格:
询价
组织或细胞经RIPA裂解后,大量的基因组DNA从细胞核中释放出来,而且它们不是独立存在的,往往是与核蛋白形成复合体而存在的,这就使得提取物十分粘稠,呈鼻涕状,在提取蛋白的过程中如不能很好的处理这些粘稠的基因组会造成蛋白提取效率的降低及核蛋白的丢失。有人采用机械法,比如超声波处理等,或DNase及RNase消化来减少或消除核酸的影响,但是由于操作的非标准化,往往很难评估核酸清除步骤的有效性和数据稳定性。Benzonase Nuclease与RIPA裂解液等蛋白抽提试剂配合使用,可以很好的消除粗提物中的核酸,降低粘度。

Benzonase Nuclease是一种核酸内切酶,可将核酸降解成2~5个碱基的5'单磷酸核苷酸,因其能高效降解任何形式(双链,单链,线状,环状)的DNA和RNA而没有蛋白裂解活性,又被称为“全能核酸酶”。Benzonase Nuclease能有效降低蛋白样品粘度,去除蛋白样品中核酸的污染,且无蛋白酶活性残留和内毒素污染,核酸酶活性达1×106U/mg蛋白。Benzonase Nuclease在降低粘性的同时, 也具有多种其他用途,如:减少了样品处理时间,增加了蛋白产量,离心时时沉淀和上清分离的更彻底,更便于溶液的离心(尤其是超滤);提高色谱纯化的效率等。

单位定义:37℃,pH 8.0反应条件下,在30分钟内使△A260值降低1.0(相当于完全消化37μg DNA)的酶量定义为一个活性单位。
注意:含大量蛋白、细胞壁、其它盐分的粗制品,对该酶活性有部分抑制作用,使用时需要增加酶的用量。

产品应用:
·蛋白提取时去除核酸污染:在重组蛋白纯化或组织细胞样品蛋白提取时,Benzonase Nuclease可有效降低样品粘度,利于下游操作;
·与细胞或细菌裂解液配合使用,去除粗提物中的核酸,降低溶液粘性,提高蛋白质产量;
·减少存放的外周血单细胞(PBMC)的结块现象;
·降解核酸,利于不可溶性蛋白复性前高质量包涵体制备;
·有效去除带负电荷的核酸对双向SDS-PAGE蛋白样品的影响,改善蛋白质的分离效果,增强2-DE分辨率;
·疫苗和病毒样品制备中DNA污染的去除。

超强兼容性:
全能核酸酶在非常广泛的条件下,都能保持很高的稳定性和消化核酸的活性,这使其能够与多种细胞裂解液,如RIPA,或含有多种离子和非离子型去污剂、还原剂的蛋白提取试剂等兼容。例如:>100mM的盐酸胍会完全抑制Benzonase活性,1mM的EDTA会部分抑制Benzonase活性,5mM的EDTA会使活性丧失90%,1mM的PMSF则不会抑制核酸酶活性。 浓度<0.4%的Triton? X-100对核酸酶活性几乎无影响,<0.4%的脱氧胆酸钠使核酸酶可保持70%的活性,超过该临界值之后核酸酶活性会急剧降低,1%的浓度会使活性丧失70%;0.05%的SDS对核酸酶活性几乎无影响,而SDS浓度在0.1%~1%之间时,核酸酶在变性后活性会急剧降低,可通过增加核酸酶的量使活性得到补偿。另外,核酸酶可耐受6M尿素,当尿素达到7M时,核酸酶在变性后活性会急剧降低,亦可通过增加核酸酶的量使活性得到补偿。
条件参数最适条件可作用条件范围
Mg2+1-2mM1-10mM
pH8.0–9.26–10
温度37℃0–42℃
DTT0–100mM>100mM
β-Mercaptoethanol0–100mM>100mM
一价阳离子浓度(如Na+,K+)0–20mM0–150mM
PO43-0–10 mM0–100mM


实例分析:

全能核酸酶实例1
图1:经RIPA裂解未经Benzonase Nuclease处理的样品,大量基因组DNA释放出来,呈鼻涕状。
全能核酸酶实例2
图2:离心后,左管为未加Benzonase Nuclease,有鼻涕状粘稠物质悬浮在管中,右管为加Benzonase Nuclease,上清为透明液体。
全能核酸酶实例3
图3:离心收集过夜培养的BL21 E.coli菌体,加入大肠杆菌蛋白提取液,然后分为三组A.B.C,A组不做任何处理,B组超声处理,C组加入Benzonase Nuclease,通过BCA法测定蛋白浓度。
全能核酸酶实例4
图4:取40mg小鼠的肝脏组织液氮研磨后加入RIPA裂解液,然后分为三组A.B.C,A组不做任何处理,B.C组分别加入3μl和10μl的Benzonase Nuclease,室温处理10分钟,离心后如图所示。
全能核酸酶实例5
图5:A为未加Benzonase处理的,B为加Benzonase处理的样品进行二维电泳。如图所示,Benzonase处理的样品可显著增加二维电泳的分辨率。

Benzonase Nuclease的去除:
在重组蛋白或疫苗、药物等生产过程中应用Benzonase去除核酸后,可通过色谱纯化去除核酸酶,然后可通过检测残留活性或ELISA检测来判断去除是否成功。常见的色谱纯化方式有阳离子交换介质和阴离子交换介质,具体的Benzonase去除条件如下表:
阴离子交换介质pH样品和平衡缓冲液Benzonase核酸酶
TMAE7.050mM Tris/200mM NaClnot bound
TMAE7.050mM Tris/50mM NaClnot bound
TMAE8.050mM Tris/250mM NaClnot bound
TMAE8.0>50mM Tris/100mM NaClnot bound
TMAE9.0>50mM Tris/200mM NaClnot bound
TMAE9.050mM Tris/100mM NaClnot bound
DEAE7.050mM Tris/200mM NaClnot bound
DEAE7.050mM Tris/50mM NaClnot bound
DEAE8.050mM Tris/250mM NaClnot bound
DEAE8.0>50mM Tris/100mM NaClnot bound
DEAE9.0>50mM Tris/250mM NaClnot bound
DEAE9.050mM Tris/50mM NaClnot bound
DMAE8.0>50mM Tris/250mM NaClnot bound
DMAE8.050mM Tris/50mM NaClnot bound

阳离子交换介质pH样品和平衡缓冲液Benzonase核酸酶
SO3-6.020mM phosphate/100mM NaClbound
SO3-6.020mM phosphate/200mM NaClnot bound
SO3-5.020mM acetate/200mM NaClbound
SO3-5.0>20mM acetate/700mM NaClnot bound
SO3-4.0>20mM acetate/300mM NaClbound
SO3-4.020mM acetate/800mM NaClnot bound
C00-6.020mM phosphate/0mM NaClnot bound
C00-5.020mM acetate/40mM NaClbound
C00-5.020mM acetate/100mM NaClnot bound
C00-4.0>20mM acetate/150mM NaClpartially bound
C00-4.020mM acetate/400mM NaClnot bound


操作方法:
1. 组织处理方法:将 30-50mg 动植物组织研磨充分后,加入100-200μl RIPA 裂解液(货号:MT0066),同时加入1μl Benzonase Nuclease,旋涡振荡混合均匀,室温孵育30分钟。
2. 细胞处理方法:将 106~107悬浮细胞液 6000 rpm离心10分钟 后,弃掉上清液,使用100μl RIPA 裂解液重悬细胞,同时加入1μl Benzonase Nuclease,旋涡振荡混合均匀,室温孵育30分钟。
??注意:贴壁细胞重悬于 PBS 后,处理方法同悬浮细胞。
3. 大肠杆菌细胞处理:将500μlE.coli培养液 8000rpm离心5分钟后,弃掉上清液,使用100μl 大肠杆菌裂解液(货号:MT0067)重悬细胞,同时加入1μl Benzonase Nuclease,旋涡振荡混合均匀,室温孵育30分钟。
4. 裂解步骤完成后,将裂解产物于 13,000 rpm离心10分钟后,取上清即为提取蛋白(包涵体蛋白留取沉淀为提取蛋白)。
5. 提取完蛋白后可利用BCA蛋白定量试剂盒(货号:MT0072)测定蛋白浓度。

储存条件:-20℃,可保存2年。

别名:全能核酸酶;非限制性核酸内切酶;核酸降解酶;DNA降解酶;RNA降解酶;广谱核酸酶;Benzonase核酸酶

核酸酶选择指南:
货号消化活性底物产物用途
MT0068?Benzonase核酸酶核酸内切酶活性任何形式的DNA/RNA3-5bp寡核苷酸消化任何形式的核酸;
去除蛋白样品中的核酸污染。
MT0084?T5核酸外切酶5'-3'核酸外切酶活性单链和双链DNAdNMP至6寡核聚体DNA消化和Gibson组装
MT0085?T7核酸外切酶5'-3'核酸外切酶活性双链DNAssDNA和二核苷酸消化双链DNA
MT0086?λ核酸外切酶5'-3'核酸外切酶活性单链和双链DNAssDNA和dNMP消化双链DNA
MT0087?核酸外切酶I3'-5'单链外切酶活性单链DNAdNMP、二核苷PCR扩增后降解消化引物
MT0088?双链DNA特异性核酸酶双链DNA核酸酶活性双链DNA2-8bp寡核苷酸去除RNA样品中的DNA污染。
MT0089?Rnase H核糖核酸内切酶活性杂交到DNA链上的RNAssDNA和2-8bp的
5'磷酸寡核苷酸
除去杂交到poly(dT)上的mRNA poly(A);
在cDNA第二链合成时除去mRNA。
MT0090?Dnase I核酸内切酶活性单链和双链DNA2-3bp寡核苷酸蛋白样品中DNA的去除
MT0091?Rnase A核酸内切酶活性单链RNA3'-核苷磷酸质粒或基因组中RNA污染的去除
MT0092?DNA损伤修复酶核酸外切酶活性DNADNA修复
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