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产品目录

Protein A磁珠抗体纯化试剂盒图片
产品货号:
CZ012
中文名称:
Protein A磁珠抗体纯化试剂盒
英文名称:
ProteinA Antibody Purification
产品规格:
5ml/100ml/500ml
发货周期:
1~3天
产品价格:
询价
产品概况:
Protein A(or Protein G)抗体纯化磁珠系列产品是由NHS活化的超顺磁性微球与Protein A(or Protein G)共价结合形成的复合微粒。与当前国际免疫磁珠市场上同类产品相比,该产品具有更高的抗体结合能力和较低的蛋白非特异吸附率,洗脱条件更均一,一步纯化即可从血清样品中分离出纯度大于90%的抗体。
本产品为微米级磁性微球,熟练操作可在15 min内完成抗体吸附过程,30 min内完成抗体纯化流程。本产品可重复使用,适用于血浆、腹水、组织培养上清液等样品中的抗体纯化,也可用于抗体固定及其它相关研究。用户可根据目标抗体的种属来源及亚型选择磁珠的类别,Protein A,Protein G磁珠与不同抗体的亲和性比较参见附表1。
操作流程(以纯化人血清IgG为例):
1. 样品处理:取人血清100 μL至1.5 mL EP管中,接着加入900 μL Binding/Washing buffer,充分混匀。
2. 磁珠预处理:将抗体纯化磁珠漩涡振荡30 s,使磁珠充分重悬;取200 μL 10%(v/v)磁珠悬液置于另一新的1.5 mL EP管中。对磁珠悬液进行磁性分离,弃上清液,用1 mL Binding/Washing buffer洗涤2次,磁性分离,管中磁珠可直接用于抗体分离。
注:该步骤磁珠的用量可根据磁珠对目标抗体的最大结合量进行调节,当目标抗体的浓度大于150μg/mL时,用户可取1.2~1.5倍磁珠用量(计算方式:如1.5*样品中目标抗体含量/磁珠最大结合量),若目标抗体浓度过低,如低于70 μg/mL时,客户为了提高抗体回收率,可增加磁珠用量,如提高至3倍磁珠用量。
3. 抗体吸附:在步骤2预处理的磁珠管中加入步骤1处理的样品溶液,漩涡振荡均匀,在室温下(约25℃)置于翻转混合仪或者手工轻轻翻转EP管,促使样品和磁珠充分接触并吸附,翻转约15 min后进行磁性分离,移弃上清液。
4. 磁珠洗涤:向EP管中加入1 mL Binding/Washing buffer,振荡重悬磁珠后进行磁性分离,移弃上清液;该操作重复3次。
5. 抗体洗脱:在上述完成磁珠洗涤的EP管中加入0.5~1.0 mL Elution buffer,用移液器吹打或者涡旋震荡下迅速重悬,然后在室温下(约25℃)置于翻转混合仪或者手工轻轻翻转EP管,翻转10 min后进行磁性分离,收集上清液至新的EP管。
注意事项:该步骤Elution buffer用量,建议客户使最终洗脱的抗体浓度控制在0.6~1.2 mg/mL,此时第1次洗脱条件中95%以上的抗体将被洗脱下来;若Elution buffer用量过少,会导致部分抗体在第1次洗脱时仍然留在磁珠上,从而导致抗体回收率降低。
6. 抗体中和:在步骤5抗体洗脱液中加入一定量的Neutrilization buffer,一般为抗体洗脱体积的1/10,最终使洗脱的抗体pH值保持中性环境,以利于维持抗体的生物活性,避免抗体失活。
7. 磁珠后处理:使用后的磁珠用Elution buffer洗涤2次,磁性分离,弃上清液;接着用Binding/Washing buffer洗涤3次,磁性分离,弃上清液,加入200 μL Storage buffer重悬磁珠 ,置于2~8℃保存。
磁珠再生:
1. 磁珠多次使用后会有沉淀蛋白、强疏水性蛋白、脂蛋白等杂质非特异性吸附到磁珠上,为了保证磁珠的使用效率,建议持续使用5次后进行磁珠再生处理。
2. 按约每1 mL 10%(v/v) 磁珠加入1 mL 1%(v/v)Triron X-100磁珠再生缓冲液,振荡均匀,在室温下置于翻转混合仪或者手工轻轻翻转混合,10 min后进行磁性分离,弃上清液。
3. 马上加入1 mL Binding/Washing buffer进行重悬,然后磁性分离,弃上清液,重复该操作3次。
4. 加入1 mL Storage buffer重悬磁珠 ,置于2~8℃保存。
注意事项:
1. 进行抗体纯化操作之前,请务必认真阅读本操作说明书。
2. 本产品须与磁性分离器配套使用。
3. 磁珠使用前应充分振荡均匀。
4. 磁珠应保存在储存溶液中,防止干燥。
5. 请勿将磁珠冷冻或离心,以免引起不可逆聚集。
6. 本产品仅供研究使用。
常见问题及解答(FAQ):
Q1:如何提高抗体与磁珠结合效率?
A1: 磁珠与抗体的结合效率与抗体的种属来源及所属亚型有关,请确认抗体的类型与Protein A配基的亲和效率(附表1),如抗体所属亚型与Protein A的亲和度较低,可以通过增加抗体与磁珠的孵育时间(30~120 min)、提高结合缓冲液的pH值(8~9)及降低离子强度(25~100 mM NaCl)等方法提高亲和效率,或选择与目标抗体具有更高亲和度的配基(如Protein G或Protein A/G)。
Q2:如何提高抗体洗脱效率?
A2:抗体与Protein A配基亲和度太高导致抗体洗脱效率低,可以通过降低洗脱缓冲液的pH值(1.9~2.5)、增大洗脱缓冲液的离子强度(可选用2~3 M MgCl2)或延长洗脱时间,提高抗体的洗脱效率。但应注意抗体在低pH条件下容易形成聚集物,抗体洗脱产物应马上用碱性缓冲剂(如Tris、HEPES等)调节pH至中性。
Q3:如何避免磁珠在储存或使用过程中可能出现的聚集情况?
A3:磁珠应保存在2~8℃,使用时应避免由于污染而导致的不可逆聚集,或因干燥而导致的聚集。磁珠在低pH的洗脱缓冲液中发生聚集属于正常现象,不影响磁珠的正常使用。在Binding/Washing buffer和Elution buffer中添加终浓度为0.1%(v/v)的非离子型去垢剂(如NP-40、Tween-20或Triton X-100)可有效防止磁珠聚集。经过低pH洗脱操作的磁珠可以用Binding/Washing buffer和Elution buffer洗涤至中性,并用超声波水浴处理2 min,即可使磁珠恢复均匀状态,以上处理均不影响磁珠的抗体结合效率。
Q4:如何解决磁珠易粘附管壁的现象?
A4:建议使用低吸附率的耗材进行磁珠操作。另外,在缓冲液中添加0.01%~0.1%(v/v)的非离子型去垢剂(如NP-40、Tween-20或Triton X-100)可以有效降低磁珠对耗材的粘附。
Q5: 磁珠在使用过程中出现结块现象?
A5:磁珠在使用时如果出现结块现象一般较难振荡打散,容易导致分布不均,出现该问题的原因是磁珠在磁场中放置太久而使磁珠牢固的结合在一起。用超声波水浴处理2 min即可打散磁珠使其重新分散,但应注意超声处理也会使磁珠在样品溶液中捕获的抗体脱落,所以磁珠在加样后洗脱前不宜使用该方法。
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