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产品目录

粪便RNA柱式提取试剂盒图片
产品货号:
BTN101109
中文名称:
粪便RNA柱式提取试剂盒
英文名称:
Fecal RNA column Extraction Kit
产品规格:
50次
发货周期:
1~3天
产品价格:
询价
由于粪便中有机质含量丰富,对RT-PCR等后续反应有极大的抑制作用,所以从粪便中提取高纯度的RNA一直是十分棘手的问题。本产品是在粪便RNA提取试剂盒基础上开发的柱式粪便RNA提取产品。

试剂盒特点:
1. 操作比非柱式法更加简单快速,处理一个样品只需要约十几分钟。
2. 去污染效果好,RNA 纯度更高,平均OD260/280一般都在2.0左右。
3. 得到的RNA可直接用于RT-PCR、Northern杂交、cDNA 合成等实验。
4. 性价比高于进口的柱式粪便RNA提取产品。
5. 试剂无毒无害,环保。

试剂盒组成:
成分规格
溶液A50ml
酸洗玻璃珠,400μm25g
溶液B15ml
溶液C50ml
离心吸附柱50套
通用洗柱液50ml
RNA洗脱液10ml
说明书1份


储存条件:常温运输和保存,有效期两年。

使用方法:
1.在自备的3-5mL离心管中称取0.5-1 g 粪便,加入0.5g 玻璃珠和1mL溶液A,盖紧离心盖后震荡器上剧烈震荡5-10分钟。注意:如果放置在低温,溶液A可能会产生沉淀,使用前必须放在65℃水浴使沉淀彻底溶解并充分摇匀后再取用。
2. 稍微静置后将上清液(一般呈棕色)转移至一个干净的1.5mL塑料离心管中。所取上清液不要超过1mL,否则后续操作没有足够空间。
3.在离心管中加入0.3mL的溶液B和0.2mL自备氯仿,在振荡器上振荡30秒混匀。振荡器振荡时必须使管底溶液震荡起来。
4.室温12000rpm离心3~5分钟。
5. 将上清液(约0.6mL)转移到另一干净的1.5mL塑料离心管中,下层有机相和中间层含有DNA、蛋白质和其他杂质,避免触及或汲取。最好留下100μl上清液不取。
6.在上清液中加入等体积的溶液C,用手上下颠倒或振荡器振荡30秒混匀,此时溶液呈均匀的乳浊状。
7.室温12000rpm离心3分钟,两相间将有白色膜状物(蛋白质)形成。
8. 将一半的溶液转移到离心吸附柱中,套入收集管中厚12000rpm室温离心半分钟,弃收集管中的穿透液。
9. 将剩下的一半溶液转移到同一离心吸附柱中,套入收集管中后12000rpm室温离心半分钟,弃收集管中的穿透液。
10. 加0.7mL 通用洗柱液,套入收集管中后室温离心半分钟,弃收集管中的穿透液。
11. 加0.3mL 通用洗柱液,套入收集管中后室温离心半分钟,弃收集管中的穿透液。此步可以省略。
12. 将离心吸附柱套入收集管中后室温离心半分钟,弃含穿透液的收集管。此步干甩十分重要,否则残留的乙醇会影响RNA的使用。
13. 将离心吸附柱套入到一个自备的RNase-free 收集管中,加入30-100μL RNA洗脱液,室温放置1-2分钟。
14. 12000rpm室温离心半分钟,离心管中溶液即为RNA样品,可以马上使用或存放于-80℃待用。
15. RNA 完整性的电泳检测:如果需要做Northern杂交,强烈建议用户使用甲醛变性胶进行RNA电泳,因为非变性胶不能分离所有的RNA分子(BioTechniques,28:414,2000)。
16. RNA产量产率测定:将5-10μl RNA 溶于TE缓冲液中(pH7.5-8.2 之间)检测其在OD260的光吸取。通过光吸取可以得出RNA浓度(1OD260的RNA=40μg/mL),进而计算出RNA的产量(浓度X 体积)和产率(RNA产量/组织用量)。
17. RNA 纯度测定:无污染的总RNA的OD260/OD280一般在1.8-2.1之间(具体数值与其碱基组成和溶液成分等多种因素有关),高于此范围则分别表示样品可能有蛋白质污染,但一般不影响RT-PCR等反应。
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