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产品目录

软骨RNA柱式提取试剂盒图片
产品货号:
BTN101121
中文名称:
软骨RNA柱式提取试剂盒
英文名称:
Cartilage RNA column Extraction Kit
产品规格:
50次
发货周期:
1~3天
产品价格:
询价
本试剂盒专门从各种软骨组织样品中快速提取总RNA的试剂盒,它能有效克服传统TRIzol方法提取软骨组织RNA时,十分容易产生糖蛋白和酸性多糖污染这一缺点。

试剂盒特点:
1. 能有效去除糖蛋白、粘蛋白污染,OD260/280一般均在1.9以上。
2. RNA产率一般为5-15μg/100mg。
3. 操作简单,整个提取过程一般只需要10 多分钟。
4. 得到的RNA可以直接用于RT-PCR、Northern杂交、mRNA 纯化、Primer Extension、RNA Protection、in vitro translation等研究。

试剂盒组成:
成分规格
溶液A50ml
溶液B15ml
溶液C50ml
离心吸附柱50套
通用洗柱液50ml
RNA 洗脱液10ml
说明书1份


储存条件:常温运输和保存,有效期一年。溶液B需4℃保存。

使用方法:
1. 先将50-200mg 新鲜或冷冻的软骨组织液氮研磨成粉,加入1mL溶液A溶解(溶液A使用前必须放在65℃水浴使沉淀彻底溶解并摇晃混匀),然后将研磨物转移到新的1.5mL离心管中,振荡混合30秒。也可以将软骨组织剪碎后与溶液A一起用Polytron 匀浆机(内切式匀浆机)匀浆5-20秒,再转移到1.5mL离心管中。匀浆时会产生泡沫,但不影响提取效果。
2.在离心管中加入0.3mL的溶液B和0.2mL自备氯仿,在振荡器上振荡30秒混匀,此时溶液呈均匀的乳浊状。振荡器振荡时必须使管底溶液震荡起来。
3.室温12000~15000g离心3~5分钟,两相间将有约5-10 毫米厚的细胞破碎物。
4. 将上清液(约0.6mL)转移到另一干净的1.5mL塑料离心管中,下层有机相和中间层含有DNA、蛋白质和其他杂质,避免触及或汲取。最好留下100μl上清液不取。
5. 加入等体积的溶液C,充分颠倒混匀。
6. 将一半的溶液转移到离心吸附柱中,12000~15000g室温离心半分钟,弃穿透液。
7. 将剩下的一半溶液转移到同一离心吸附柱中,12000~15000g室温离心半分钟,弃穿透液。
8. 加0.7mL 通用洗柱液,室温离心半分钟,弃穿透液。
9. 加0.3mL 通用洗柱液,室温离心半分钟,弃穿透液。此步可以省略。
10.室温离心半分钟。此步十分重要,否则残留的乙醇会影响RNA的使用。
11. 将离心吸附柱转移到自备的RNase-free离心管中,加入50-100μl RNA洗脱液,室温放置1-2分钟。
12. 12000~15000g室温离心半分钟,离心管中溶液即为RNA样品,可以马上使用或存放于-80℃待用。
13. RNA 完整性的电泳检测:如果需要做Northern杂交,强烈建议用户使用甲醛变性胶进行RNA电泳,因为非变性胶不能分离所有的RNA分子(BioTechniques,28:414,2000)。
14. RNA产量产率测定:将5-10μl RNA 溶于TE缓冲液中(pH7.5-8.2 之间)检测其在OD260的光吸取。通过光吸取可以得出RNA浓度(1 OD260的RNA=40μg/mL),进而计算出RNA的产量(浓度X 体积)和产率(RNA产量/组织用量)。注意:测定OD时不要稀释过度,否则浓度会在仪器能测的范围之外。本方法提取的RNA 测OD时一般最多只能稀释10-20倍。
15. RNA 纯度测定:无污染的总RNA的OD260/OD280一般在1.8-2.1 之间(具体数值与其碱基组成和溶液成分等多种因素有关),高于此范围则分别表示样品可能有蛋白质污染,但一般不影响RT-PCR等反应。
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