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产品目录

非冻型血液RNA保存液图片
产品货号:
BTN111202
中文名称:
非冻型血液RNA保存液
英文名称:
RNAhold Blood RNA non-freezing preservation solution
产品规格:
100mL
发货周期:
1~3天
产品价格:
询价
由于血液富含RNase,因此血液RNA非常容易降解,是临床分子生物学研究中的一个棘手的问题。为解决此问题,本企业在非冻型组织RNA保存液的基础上,开发了本产品。

产品特点:
1. 能快速渗透到新鲜血液细胞内,抑制RNA分子的降解。保存的血液RNA常温可放置3天,4℃可放置5天,-20℃可放置3个月。
2. 操作简单,直接将本产品和新鲜血液细胞沉淀按比例混合即可。
3.适用于人新鲜血和哺乳动物新鲜血液,不适用于陈旧血液和冻凝血液,也不适用于禽类血液和其他动物血液。
4. 重复性好,效果跟进口同类产品相当。
5. 保存的样品可直接用本企业血液RNA提取试剂盒提取RNA。

储存条件:室温运输及保存,有效期两年。

使用方法:
注意:RNase污染无处不在,最好用本企业的高效无毒固相RNase清除剂处理RNA工作区域,千万不要使用烷基化试剂DEPC(相当于芥子气)。

一:以白细胞为材料的保存方法(此法效果好于全血保存法)
1.室温1500-2000 g离心新鲜抗凝血液10-15分钟,最上层为血浆,最下层为红细胞,中间层为膜状的、含白细胞的Buffy Coat(含白细胞多的血液此层可能很厚)。
2. 吸出血浆后,小心将中间的白细胞层吸出(允许污染部分红细胞)到新的离心管中,加入5-10倍体积的本产品,混匀后放常温(不超过30℃)保存不超过3天或者放-20℃保存3月(放-20℃前需要现在4℃放置过夜,然后再离心去除保存液,最后再把细胞沉淀放到-20℃。如果直接放入-20℃,冰晶会刺破白细胞,释放出其中的RNA,在后续实验去掉上清时会丢失)。

二:以EDTA抗凝全血为材料的保存方法
3. 将血液取到EDTA抗凝管中后,迅速将0.5mL血液与1.5mL本产品混合,充分颠倒混匀,然后放常温(不超过30℃)保存不超过3天或者放-20℃保存3月(放-20℃前需要现在4℃放置过夜,然后再离心去除保存液,最后再把细胞沉淀放到-20℃。如果直接放入-20℃,冰晶会刺破白细胞,释放出其中的RNA,在后续实验去掉上清时会丢失)。

三:血液RNA的提取(本产品不含RNA提取试剂。此处以本企业的跟Trizol相当的动物RNA提取试剂盒操作步骤为参考。用户也可以使用其他RNA纯化试剂)
4. 提取RNA时,如果保存的白细胞在-20℃,则需要先室温化冻,如果保存在常温或4℃,则直接使用。
5. 取1.8mL混合液到新的2mL离心管中,5000g室温离心1分钟。
6.小心吸弃上清液(本产品),细胞将形成沉淀(如果样品时全血,沉淀中将含有大量血液蛋白)。注意:上清一般会很浑浊,一定要尽可能弃尽。有时沉淀上面有白色晶体出现,属于正常现象。
7.在细胞沉淀中加入动物RNA提取试剂盒 1mL溶液A,剧烈震荡30秒(不能感觉到震荡即可,一定要看见管底液体旋转起来,否则只是液体表面的震动,下同)。震荡后颠倒几次看溶液是否均匀,如果有颗粒状物体说明还需要震荡裂解。
8.室温放置5分钟以使细胞充分裂解。
9. 将0.2mL自备的氯仿加入到离心管中,剧烈震荡30秒。
10. 12000~15000g4℃离心3分钟。一般上清为无色的水相(含RNA,约0.5-0.9mL);中间层为白色,含有DNA、蛋白质和其他细胞破碎物,不要触及;下层为有机相,一般呈深红色。注意:有时水相比重大于有机相,出现反相现象,此时应该取下面的水相。
11.小心将水相转移到另一自备的1.5mL塑料离心管中。如果水相超过0.75mL,则需要分成2管,否则在下步没法加入等体积的异丙醇。
12. 加入等体积的异丙醇到水相中,充分颠倒混匀。
13. 12000~15000g4℃离心10分钟沉淀RNA。
14. 吸弃上清。注意:如果离心后出现两个相,则需要吸弃上面的一相,然后在下相(含RNA)中加入一倍体积的超纯水和一倍体积的异丙醇,混匀后12000~15000g4℃离心10分钟沉淀RNA,吸弃上清。
15. 将75% RNase-free乙醇加入到RNA沉淀中,震荡几秒后12000~15000g4℃离心1分钟。
16. 弃上清
17. 12000~15000g4℃离心半分钟,用移液枪去除残留的液体。
18. 将20-50μL DEPC处理的水加入到沉淀中并吹打溶解,马上用于下述完整性、产率和纯度的检测,也可直接用于后续RT-PCR等试验或存放于-80℃待用。

四: RNA的检测(列出步骤仅供参考,本产品不提供相关产品)
19. RNA完整性的电泳检测:强烈建议用户使用甲醛变性胶进行RNA电泳,因为非变性胶中单链RNA分子会自生折叠成各种形状,尤其不能使用DNA上样液,因为没有经过去RNase处理。
20. RNA产量产率测定:将5-10μl RNA用TE缓冲液(pH8.2)稀释10倍后检测其在OD260的光吸取。通过光吸取可以得出RNA浓度(1 OD260的RNA=40μg/mL),进而计算出RNA的产量(浓度X体积)和产率(RNA产量/组织用量)。人血RNA产率一般为2-5μg/mL。
21. RNA纯度测定:无污染的总RNA的OD260/OD280一般在2.0左右(具体数值与其碱基组成和溶液成分等多种因素有关),高于此范围则分别表示样品可能有蛋白质污染,但一般不影响RT-PCR等反应。
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